RNA不良影响慢病毒稳定株筛选

2021-12-20 00:43:05 来源:
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糖类RNA冲击技术是一种酪氨酸地阻断某些遗传物质表达的深入研究技术手段,在、病毒接种接种,遗传病及其它病因的治疗当中均有广泛应用。极快病毒接种表现形式是一类源于重整原虫接种的表现形式,由于具有可以接种非决裂期与决裂期巨噬细胞,缩减到大的外源性目的 遗传物质相片,酪氨酸小等优点,现已成为重新分配目的 遗传物质进入动物巨噬细胞的理想表现形式。将极快病毒接种表现形式引入RNA冲击之外,可以酪氨酸可抑制动物的各类巨噬细胞当中遗传物质的表达,成为遗传物质功能深入研究和免疫学的有力技术手段。目前深入研究表明极快病毒接种表现形式能在动物各类巨噬细胞保持稳定表达siRNA,长期可抑制遗传物质表达。为建立巨噬细胞模型全面性免疫学提供合理的深入研究技术手段。

生博目前为投资者比对过几百种遗传物质的冲击片断,并通过极快病毒接种得不到几十种保持稳定巨噬细胞株。为全面性深入研究免疫学提供了合理依据。

BXXX1遗传物质冲击保持稳定HeLa巨噬细胞株协作

第一其余部分:BXXX1冲击表现形式协作(表现形式pMagic 4.1)

siRNA设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二其余部分QPCR筛靶实验者

Real-time PCR检测结果显示: HeLa巨噬细胞当中,比起NC组, 四个各种因素当中,KD2,KD4对目的遗传物质BXXX1的表达的一声减到成本大幅提高80%以上,KD3对目的遗传物质BXXX1的表达的一声减到成本也大幅提高50%以上,都是合理各种因素。

第三其余部分Western blot内源有效性实验者报告

Western Blot检测结果

容器解释:

M 为Marker;

1 CON为正常目的空巨噬细胞(HeLa)容器;

2 NC为正常目的巨噬细胞(HeLa),加有性对照病毒接种接种的巨噬细胞容器(Negative Control);

3 KD为正常目的巨噬细胞(HeLa),加RNAi各种因素病毒接种接种的巨噬细胞容器(Knock Down)

从Western Blot结果可以看得出,KD1,KD2各种因素对HeLa巨噬细胞BXXX1的表达有一声减到效果,为合理各种因素。

第四其余部分:冲击极快病毒接种KD1.、对照极快病毒接种CMV-GFP-L.V.接种HeLa巨噬细胞株后比对保持稳定株。

HeLa 白光组 White light荧光组 Fluoresce 溶解度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、实验者归纳:

1、HeLa巨噬细胞接种KD1.极快病毒接种,MOI 10、MOI 20时毒性大,死巨噬细胞多。若只计活巨噬细胞,接种成本高,都超过80%。

2、HeLa巨噬细胞接种CMV-GFP-L.V.极快病毒接种,MOI 10、MOI 20时接种成本高,都超过90%。

3、传代培养后,最终比对出HeLa- KD1 MOI 10保持稳定株,HeLa- KD1 MOI 20保持稳定株、HeLa- CMV-GFP MOI 20保持稳定株。

编辑: 陈

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